De sterkt bevæpnede politifolkene rev ned telt og barrikader som demonstrantene hadde bygd, og tok over deler av plassen.
Sangeren Ruslana appellerte til politiet over høyttalere om ikke å adlyde ordre og ikke å skade demonstrantene.
Delte demonstrantene i grupper
EUs delegasjon i Ukraina sier de prøver å få kontakt med ansvarlige ukrainske myndigheter for å få dem til å hindre bruk av vold mot innbyggerne.
Det var ingen tegn til voldsbruk, men politiet delte demonstrantene opp i to grupper etter hvert som de overtok nye deler av plassen som har vært holdt av demonstrantene i to uker.
Mange av demonstrantene ble trengt sammen rundt en scene midt på plassen, men politiet gjorde ikke forsøk på å jage dem bort fra plassen, som de har okkupert i ti dager.
Noen av demonstrantene holdt opp sine mobiltelefoner i lufta som stearinlys og sang nasjonalsangen, mens kirkeklokkene ringte i en katedral 2 kilometer borte.
Den ukrainske opposisjonslederen Arseniy Yatsenyuk oppfordrer til masseprotester, og vil mobilisere millioner i gatene, etter politiaksjonen mot protestleiren i natt. Yatsenyuk leder partiet til den fengslede tidligere statsministeren Julia Timosjenko.
President Viktor Janukovits sa etter et møte med EUs Catherine Ashton i går at han er klar til å ta opp igjen dialogen med EU.
Hun ble tatt i mot med jubel da hun møtte demonstrantene i protestleiren.
EU bekymret
EUs delegasjon i Kiev sier at de har forsøkt å komme i kontakt med ukrainske myndigheter for å hindre at politiet bruker vold mot demonstrantene, som protesterer mot at president Viktor Janukovitsj besluttet å utvide forbindelsene til Russland i stedet for å undertegne en avtale med EU.
«EU-delegasjonen forsøker å komme i kontakt med ansvarlige folk i politiet for å hindre at det brukes vold mot vanlige borgere», heter det i en melding som ble lagt ut på delegasjonens Facebook-side.
Den ukrainske opposisjonslederen Arsenij Jatsenjuk appellerte til folk om å møte fram for være med på en protestdemonstrasjon med en million deltakere.
– Vi vil ikke tilgi dette. Hit kommer det millioner, og hans regime vil falle, sa Jatsenjuk som leder partiet til den fengslede eksstatsministere Julia Timosjenko.
TV-tale
Tidligere på dagen fordømte president Viktor Janukovitsj oppfordringene til revolusjon i landet. Han sa det ikke fantes noen alternativer til de nære handelsforbindelsene med Moskva.
Janukovitsj holdt tirsdag en TV-sendt tale etter to uker med omfattende demonstrasjoner i landet.
I talen sa presidenten at den pågående uroen er en trussel mot nasjonens sikkerhet, og at det ikke foreligger noe alternativ til å gjenoppta handelsforbindelsene med myndighetene i Moskva.
Ukraina skulle opprinnelig ha undertegnet samarbeidsavtalen med EU på et toppmøte sammen med EU og andre tidligere sovjetstater for et par uker siden, men trakk seg i ellevte time.
Tre uker
Protestene i Kiev har nå pågått i snart tre uker. Tirsdag var om lag 2.000 provestlige demonstranter samlet i opposisjonens base, teltleiren i sentrum av hovedstaden Kiev.
Minst ti demonstranter ble såret da opprørspoliti banket løs med batonger på demonstranter natt til tirsdag, samtidig som sikkerhetsstyrker tvang demonstrantene bort fra områdene rundt regjeringsbygningene i Kiev, opplyser Oleg Tjagnybok, leder for opposisjonspartiet Svoboda.
Senere på dagen ble EUs kontorer i Kiev blokkert av et 50-talls «kraftige menn», ifølge nyhetsbyrået Interfax. Ansatte ved kontoret sier at mennene hadde med seg ukrainske flagg, og at de delte ut flygeblader skrevet på engelsk med krav om at EU slutter å legge press på Ukraina. Opplysningene fikk det ukrainske utenriksdepartementet til å be politiet om å sørge for at blokaden avbrytes med en gang.
EUs utenrikssjef Catherine Ashton var tirsdag i Kiev for å diskutere situasjonen i landet med president Viktor Janukovitsj. Presidenten møtte også landets tre tidligere presidenter, Leonid Kravtsjuk, Leonid Kutsjma og Viktor Jusjtsjenko, for å forsøke å finne en løsning på krisen. Han har også sagt at han støtter forslaget om å få til et rundebordsmøte med opposisjonen.