Knox og hennes italienske kjæreste Raffaele Sollecito ble først dømt for drap og seksuelt overgrep mot den britiske studenten Meredith Kercher i 2007.
I ankesaken i 2011 ble begge frikjent, og Knox reiste tilbake til USA.
Men den italienske påtalemakten anket avgjørelsen, og tirsdag ble det klart at Knox må belage seg på en ny rettsrunde om drapssaken.
Sexlek
Knox og Kercher bodde sammen i Perugia hvor de begge studerte.
Påtalemyndigheten mener sistnevnte ble drept da hun ble truet til å delta i en sexlek sammen med Knox, Sollecito og ivorianeren Rudy Guede.
Guede er den eneste som så langt er dømt for drapet.
Meredith Kercher hadde over 40 kutt og knivstikk i kroppen da hun ble funnet av politiet.
DNA-strid
Drapet og rettssaken som fulgte fikk stor internasjonal oppmerksomhet.
I mediene ble Knox omtalt som «Foxy Knoxy», et kallenavn hun skal ha gitt seg selv i et chatteprogram på nett.
Underholdningsbransjen meldte raskt sin interesse for å filmatisere historien.
Amanda Knox og Raffaele Sollecito har hele tiden bedyret sin uskyld.
DNA-beviset mot de to har imidlertid lenge vært omstridt. Mens DNA av Guede ble funnet flere steder i rommet til Kercher, på kroppen hennes og på veska hennes, mente eksperter å ha funnet DNA fra Knox på knivskaftet som ble brukt til å drepe Kercher, og Sollecitos DNA på selve knivbladet.
Refser dommeren
– Omgjøringen betyr at retten har bestemt at enkelte detaljer må vurderes på nytt. Kampen fortsetter, sier Sollecitos advokat Giulia Bongiorno til nyhetsbyrået AFP.
Påtalemyndigheten holdt sin argumentasjon for høyesterett mandag og hevdet at dommeren som frifant det tidligere kjæresteparet må ha vært på villspor.
– Dette er en merkelig blanding av lovbrudd og ulogikk og må behandles på nytt, sier Luigi Riello i påtalemakten.
Journalister som var til stede forteller at Kercher-familiens bistandsadvokat hevet hendene i været da det ble klart at saken gjenopptas.
– Denne beslutningen vil sørge for at vi får den endelige sannheten bak mordet på Meredith, sier Francesco Maresca.
Det er lite som tyder på at Amanda Knox vil returnere til Firenze når saken starter på nytt. USA har heller ikke vane for å utlevere sine statsborgere til andre land.