Prins William og prins Harrys privatsekretær skrev til kanalen og sa at de følte det vil være svært respektløst overfor deres mors minne å offentliggjøre bildene.
Bildene er fra bilulykka i august 1997, og er tatt av franske fotografer.
Bildene har ikke blitt vist tidligere.
Diana (36), Dodi Al Fayed (42) og sjåfør Henri Paul ble drept da bilen de satt i krasjet inne i Pont de l'Alma-tunnelen i Paris, da de prøvde å unnslippe paparazzi-fotografer.
LES OGSÅ
Dokumentaren "Diana: The Witnesses in the Tunnel" skal sendes i morgen kveld.
Channel 4 avviste i forrige uke at filmen inneholder bilder av Dianas siste øyeblikk. Likevel er det klart at kanalen har bestemt seg for å sende et opptak hvor en fransk lege gir prinsessen oksygen.
Upassende
Brevet fra prinsenes private sekretær ble sendt til Channel 4 sist fredag.
I brevet sto det: "Hvis det var din eller min mor som omkom i den tunnelen, ville vi at alle skulle få se den episoden? Virkelig, ville folket ha lyst til å se det?"
Clarence House sier at William og Harry følte de ikke hadde noe annet valg enn å offentliggjøre sine følelser.
Brødrene ønsker særlig at Channel 4 skal fjerne en rekke bilder av bilvraket med Diana inni, og bilder der en lege behandler henne.