Sammen med lagkompisene Asafa Powell, Yohan Blake og Nickel Ashmeade vant han gullet på 4 x 100 meter stafett med tiden 37,27.
Det er 43 hundredeler bak nasjonens egen verdensrekord.
Bolt har flere ganger uttalt at dette blir hans siste OL, og med sitt niende gull tangerer han helter som Carl Lewis (friidrett), Mark Spitz (svømming), Paavo Nurmi (friidrett) og Larisa Latynina (turn).
Japan tok en sensasjonell andreplass etter gode vekslinger. De var til slutt 33 hundredeler bak seiersherrene.
USA løp i mål som nummer tre, men ble diskvalifisert etter en feilveksling mellom Mike Rodgers og Justin Gatlin før andre etappe.
Canada rykker dermed opp på pallen, noe som betyr at Andre De Grasse tar sin tredje medalje i Rio-OL.
Her er Bolts historiske gullrekke:
Beijing 2008
- 16. august: 100 meter, 9,69 (verdensrekord)
- 20. august: 200 meter, 19,30 (verdensrekord)
- 22. august: 4x100 meter, 37,10 (verdensrekord)
London 2012
- 5. august: 100 meter, 9,63 (olympisk rekord)
- 9. august: 200 meter, 19,31
- 11. august: 4x100 meter, 36.84 (verdensrekord)
Rio 2016
- 14. august: 100 meter, 9,81
- 18. august: 200 meter, 19,78
- 19. august: 4x100 meter, 37,27